【二)聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳
胶浓度T一5.8%,交联度C一2.14%。采用Tris-甘氨酸缓冲液(pH8.3)作电
极液。电泳条件3mA/管,两小时后剥离玻管中的凝胶,普通蛋白染色,Gc带位
于白蛋白与转铁蛋白之间。
(三)上海亲子鉴定等电聚焦技术
用pH4, 5—5.4的两性电解质载体,以胶浓度为5%,交联度为3蹦的聚丙烯
M|按凝胶为介质,正极液为0.04mol/L谷氨酸,负极液为。_Imol/L的氢氧化钠,
电极问距9. 5cm。血清样品浸于滤纸上,直接点样于距负极1.3cm的胶面上,在
1800V条件下聚焦2-3小时,电泳后用抗Gc血清进行免疫固定-再用考马斯亮
蓝染色,观察结果参见图10-6.
检测精斑中Gc型时,样品需经尿素处理·并在0.5%的牛血清白蛋白和4pI
sou/ml的神经氨酸酶在4℃条件下过夜。尿液检材经过700—1000的浓缩,采用
免疫印迹法可测出尿液中Gc型。
【四】上海亲子鉴定DNA分型
Ge基因位点上的RFLP分析时有报道。用内切酶Msp工消化人DNAy用Ge
位点探针可检出具有多态性的12kb及5kb片段,这两个片段在白人中出现的频
率分别为0. 77与0.23.用Bcll消化则白丁检测到14. 3kb(白人:0.65,中国人:
0,30)及12. 6kL(白人:0.35,中国人:0.70)两个片段。近年来,对Gc基冈型的检
测,更多地采用PCR扩增Gc基因,进一步分析,除编码区的多态性外,还可揭示
Gc内含子的遗传多态信息。
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