探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq
酶的5’一3 7外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从
而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形
成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
Taqman实时荧光定量PCR技术对SNP分型的原理是同时使用针对SNP不
同序列的荧光Taqman探针,只有与靶序列完全匹配的探针才能被切割,在PCR
扩增中被水解释放荧光信号。如果探针与靶序列存在错配碱基,就会减少探针与
靶序列的结合,探针就不会被Taq酶的5’一3’外切酶活性切割,其报告荧光基团和
淬灭荧光基团不能分离,荧光不能释放,荧光监测系统就不能接收到荧光信号。不
同探针标记不同颜色荧光报告信号。利用多通道荧光PCR仪检测结果,可以判断
单核苷酸多态性 |