方法二上海亲子鉴定取骨粉适量分装于1. 5ml Eppandorf管中；加入适量0.5mol/L
EDTA(pH8.o)溶液。搅拌均匀置于摇床上，脱钙3次，每次12小时，每次用无菌
水洗两遍，去上清；沉淀中加入适量裂解液(lOmmol/L Tris-HCI pH8.O，lOmmol/L
EDTA, lOOmmol/L NaCl. 2% SDS,0.5mg/mIPK. 39mmoUL DTT)于56℃放置
12小时；复加PK至终浓度Img/ml．于56aC放置2垂小时；上清液用苯酚三氯甲烷
抽提；抽提液经离心超滤纯化柱纯化浓缩。用200plI纯水回收DNA; DNA浓缩液
用冷乙醇沉淀、挥干，最后以20～40yl纯水溶解备用。
PTB、胍盐、尿素等是DNA自然和人工交联强有力的剥脱剂，能够促进DNA从
组蛋白上释放。脱钙的好坏对骨骼DNA分析影响很大。不脱钙，直接消化效果不
好。脱钙后有助于细胞的分散。裂解液中的SDS及EDTA协同作用使细胞膜及核
膜破坏，将组蛋白从DNA分子上拉开，并抑制上海亲子鉴定DNA酶活性，增加DNA产量。为了
有效地脱钙，在提取骨骼DNA时，应视检材陈旧、污染及腐败程度，适当增加脱钙次
数及骨粉的用昔。消化DNA时可延长消化时间，其间上海亲子鉴定需适时补加蛋白酶K，DTI并
反复振摇。目前，苯酚一三氯甲烷加Chelexl00法、Chel眈loo加硅化滤膜法、硅珠法、
联合运用十六烷基三甲基溴化胺(GTAB)与磁珠法均能成功从骨骼中提取DNA。 |
