基本方法
1．测序用模板的制备测序用模板的制备的方法有磁珠固相法和酶促法两
种。其中磁珠固相法可以实现仪器自动化操作，即采用生物素标记的引物进行常
规PCR扩增，再用抗生蛋白链菌素涂层微球制备单链测序模板；最后加入测序引
物退火。
2．测序反应在测序模板中加入测序反应混合液，依次加入dATP、dCTP、
dTTP和dGTP进行测序反应。焦测序标准混合液的组成为：0.Imol/L Tris-
HAc(pH 7.7),2mmol/L EDTA, lOmmol/L Mg(Ac)2,0.1% BSA, Immol/L二
硫苏糖醇(DTT)，3mmol/L APS，0.4g/L PVP，0.4mmol/L D—虫荧光素，200U/L
三磷酸腺苷硫酸化酶，2U/ml三磷酸腺苷双磷酸酶，lOU/ml无外切酶活性的
DNA聚合酶Klenow，适量荧光素酶（使Inmol/L PPi获得适当的灵敏度）。
