检材DNA常出现降解,甚至被破坏,尤其是腐败、污染、陈旧的检材

作者:strdna  

基本技术

    DNA纹印和DNA指纹技术同属RFIP分析,基本技术程序相同,实验步骤分生物检材基因组DNA的提取与定量、限制性核酸内切酶嗨切消化、电泳分离、印迹转移、探针制备和标记、分子杂交和自显影等.

(一)上海亲子鉴定DNA的提取、纯化和定量

DNA存在于每一个有核细胞中,因此也存在于犯罪现场遗留的生物检材中。生物检材多种多样,常见有血痕、精斑、唾液斑、毛发、骨骼、指甲、指纹、组织碎片、鼻涕、头皮屑等;检材的基质也多种多样,有衣服、日常用具、烟头、树木草叶、土壤、水泥、塑料、玻璃、皮革等,对DNA分析可能存在不同程度的干扰。生物学检材多从案件现场收集,不可避免会受到复杂的环境因素的影响,检材DNA常出现降解,甚至被破坏,尤其是腐败、污染、陈旧的检材。因此提取检材DNA应根据现场提取的检材种类、来源和保存条件,有针对性地选择提取方法。

    1.检材的DNA提取  上海亲子鉴定从生物检材中提取基因组DNARFLP分析的前提。常规采用有机溶剂提取法。有机溶剂提取法即经典的饱和酚一氯仿提取法,基本提取过程分四个步骤:首先在碱性和螯合剂EDTA条件下溶解细胞膜和核膜;然后利用阴离子去污剂SDS和蛋白酶K消化核蛋白,分离DNA;第三步用苯酚和氯仿有机溶剂萃取DNA.除去蛋白酶、去污剂和残留蛋白;最后用乙醇沉淀DNA去除残留的氯仿,得到纯净的检材DNA。提取过程中,EDTA既可螯合金属离子Ca21-Mg2+等,还可抑制核酸酶活性,起到保护DNA的作用。有机溶剂可使核蛋白变性溶解。离心后,有机溶剂位于离心管下层,溶解有DNA的水相在上层。有机溶剂提取法可以从检材中提取到20kb以上的大分子DNADNA纯度较高,适宜于RFIP分析。

上海亲子鉴定http://www.51gtdna.com/上海亲子鉴定

 

 

 

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