【一)上海亲子鉴定基本分型技术
PCR-STR分型技术原理和步骤与小卫星VNTR的PCR分型基本一致,包括上海亲子鉴定模板DNA提取与定量、PCR扩增、电泳分离、显带及基因型判定。
1.模板DNA提取与定量 常规采用Chelex-IOO法提取DNA。常见血样检材经过蒸馏水溶细胞,12000r/min离心后将沉淀悬浮于s26 Chelex-IOO溶液,经56℃孵育30分钟,振荡后置100℃8分钟,重新振荡后8000r/min离心,取上清液作为PCR模板。组织检材或陈旧血痕,在提取液中加入lOmg/ml浓度的蛋白酶K,有利于模板DNA提取。获得的模板DNA需按前述方法进行定量,过高或过低的模板量均不利于STR分型。
2.PCR扩增采用标准的50~1体积PCR扩增体系,模板DNA用量lO~lOOng,常能够得到满意的扩增产物。
3.电泳分离 常用T6%、C5%的PAG电泳,凝胶厚Imm。电泳缓冲液.
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