血样检材常规采用Chelex-IOO法提取DNA

作者:strdna  

【一)上海亲子鉴定基本分型技术

    PCR-STR分型技术原理和步骤与小卫星VNTRPCR分型基本一致,包括上海亲子鉴定模板DNA提取与定量、PCR扩增、电泳分离、显带及基因型判定。

    1.模板DNA提取与定量  常规采用Chelex-IOO法提取DNA。常见血样检材经过蒸馏水溶细胞,12000r/min离心后将沉淀悬浮于s26 Chelex-IOO溶液,经56℃孵育30分钟,振荡后置1008分钟,重新振荡后8000r/min离心,取上清液作为PCR模板。组织检材或陈旧血痕,在提取液中加入lOmg/ml浓度的蛋白酶K,有利于模板DNA提取。获得的模板DNA需按前述方法进行定量,过高或过低的模板量均不利于STR分型。

    2PCR扩增采用标准的50~1体积PCR扩增体系,模板DNA用量lOlOOng常能够得到满意的扩增产物。

    3.电泳分离  常用T6%C5%PAG电泳,凝胶厚Imm。电泳缓冲液.

上海亲子鉴定http://www.51gtdna.com/上海亲子鉴定

上一篇:STR分型标准物是由靶基因座所有等位基因的混合物组成
下一篇:在电泳的过程中随时监测DNA片段的泳动过程
网友评论
推荐文章